BOD5測(cè)定通常采用標(biāo)準(zhǔn)稀釋與接種法(GB 7488--87)，其操作為，經(jīng)中和及除去毒性物質(zhì)并經(jīng)稀釋后的水樣(必要時(shí)加入適量含好氧微生物的接種液)置入培養(yǎng)瓶中，于在20oC暗處培養(yǎng)5d，通過(guò)分別測(cè)定培養(yǎng)前后水樣中溶解氧的含量，來(lái)計(jì)算出5d內(nèi)的耗氧量，再根據(jù)稀釋倍數(shù)求得其BOD5。
BOD5的測(cè)定是生物作用和化學(xué)作用的共同結(jié)果，必須嚴(yán)格按照操作規(guī)范進(jìn)行，變更任何一個(gè)條件，都將影響測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性和可比性。影響B(tài)OD5測(cè)定的條件包括pH值、溫度、微生物種類和數(shù)量、無(wú)機(jī)鹽含量、溶解氧和稀釋倍數(shù)等。
化驗(yàn)BOD5的水樣必須充滿并密封于取樣瓶中，在2～5oC的冷藏箱內(nèi)保存到分析時(shí)。一般應(yīng)在采樣后6h內(nèi)進(jìn)行檢驗(yàn)，在任何情況下，水樣的貯存時(shí)間不能超過(guò)24h。
測(cè)定工業(yè)廢水的BOD5時(shí)，由于工業(yè)廢水通常溶解氧含量較少而且成分多為可生化降解的有機(jī)物，為保持培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的好氧狀態(tài)，必須將水樣稀釋(或接種稀釋)，這一操作是標(biāo)準(zhǔn)稀釋法的最大特征。為確保測(cè)得結(jié)果的可靠性，對(duì)于稀釋后的水樣培養(yǎng)5d的耗氧量必須大于2mg/L，殘留溶解氧必須大于1mg/L。
投入接種液是為了保證有一定量的微生物降解水中的有機(jī)物，接種液的量以使5日耗氧0.1mg/L以下為佳。使用由金屬蒸餾器制備的蒸餾水作為稀釋水時(shí)，應(yīng)注意檢查其中的金屬離子含量，以避免因此抑制微生物繁殖和代謝。為確保稀釋水中溶解氧接近飽和，必要時(shí)可通入凈化空氣或純氧，然后于在20oC培養(yǎng)箱中放置一定時(shí)間，使之與空氣中氧分壓達(dá)到平衡。
稀釋倍數(shù)的確定是以培養(yǎng)5日耗氧大于2mg/L，剩余溶解氧大于1mg/L為原則。稀釋倍數(shù)過(guò)大或過(guò)小，都會(huì)導(dǎo)致檢驗(yàn)失敗。而且由于BOD5分析周期較長(zhǎng)，一旦出現(xiàn)類似情況，就無(wú)法以原樣補(bǔ)測(cè)。初測(cè)某一工業(yè)廢水的BOD5時(shí)，可以首先測(cè)定其CODCr，然后查閱參考已有的水質(zhì)類似的廢水的有關(guān)監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)，初步確定待測(cè)水樣BOD5/CODCr值，據(jù)此推算出BOD5的大致范圍和確定稀釋倍數(shù)。
對(duì)含有抑制或殺滅好氧微生物代謝活動(dòng)的物質(zhì)的水樣，直接用通常方法測(cè)定BOD5的結(jié)果會(huì)偏離實(shí)際值，必須在測(cè)定前做相應(yīng)的預(yù)處理，這些對(duì)BOD5測(cè)定有影響的物質(zhì)和因素包括重金屬及其他有毒的無(wú)機(jī)物或有機(jī)物、余氯等氧化性物質(zhì)、pH值過(guò)高或過(guò)低等。
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